Caractérisation de bactériocines anti-listeria produites par des souches lactiques isolées à partir du lait de chamelle
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Date
2014
Authors
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Publisher
Université Mouloud Mammeri
Abstract
Les bactériocines sont des molécules antimicrobiennes de nature peptidique, de poids moléculaire généralement inférieur à 10 KDa. Elles sont produites par des bactéries et actives contre des souches phyllogénétiquement proches.
Nous avons testé le pouvoir bactériocinogène de souches isolées du lait camelin par la méthode de diffusion des puits, suivi du test d’inactivation aux protéases (GONZALEZ et al, 2007). Les souches ayant donné les meilleures zones d’inhibition ont été sélectionnées, il s’agit des souches : Lactococcus lactis ssp lactis CH05, Lactococcus lactis ssp raffinolactis CH07, Lactococcus lactis ssp lactis CH08 et Lactobacillus brevis/buchnerii.
Les peptides antibactériens sont extraits par la méthode d’adsorption/désorption de YANG (1992), puis séparés par une PAGE-SDS et leur activité est détectée par la technique du zymogramme (NISSEN-MEYER et al, 1992).
Nous avons d’autre part, réalisé une caractérisation génétique de ces molécules. Pour se faire, les deux souches de CH05 et CH07 sont choisies. Nous avons procédé par la méthode de cure des plasmides en utilisant deux antibiotiques, la rifampicine et la novobiocine, comme agents curant. Les mutants Bac- obtenus ont subi les tests d’activité par la méthode de diffusion des puits ainsi que par la technique du zymogramme, en utilisant comme témoin positif, les souches sauvages Bac+.
Les 4 souches ont donné des zones d’inhibition à l’égard de la souche cible Listeria innocua F, par le test de diffusion des puits avec des diamètres de 14mm, 13mm, 08mm et 16mm, pour les souches CH05, CH07, CH08 et CH15 respectivement. Ainsi que par la technique du zymogramme avec des zones d’inhibition situées entre 5 et 10KDa. Les bactériocines produites par les trois souches de lactococcus sont sensibles aux protéases utilisées, tandis que celles produites par le lactobacille y résistent.
La disparition des zones d’inhibition après la cure des plasmides, confirme l’emplacement plasmidique des clusters génétiques des bactériocines produites par les souches de Lactococcus. D’autre part, l’apparition de la sensibilité des mêmes souches à leurs bactériocines, après la cure plasmidique, indique que les gènes d’immunité sont également ploasmidiques. Enfin, notre travail s’achève avec la détermination des CMI des extraits bactériociniques des deux souches modèles. Les valeurs trouvées sont respectivement : 14,28 UA/ml et 7,14UA/ml.
Description
76 p. : ill. ; 30 cm. (+CD-Rom)
Keywords
Lait de chamelle, Lactococcus, Lactobacillus, Bactériocines, Zymogramme, Cure plasmidique, Listeria
Citation
Spécialité : Sciences Biologiques; Option: Biochimie Appliquée aux Bio-industries