Département de Biochimie

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Impact d'une hyperhomocystéinémie sur les maladies cardiovasculaires chez un modèle murin
(Université Mouloud Mammeri Tizi Ouzou, 2023) Zerrouk, Fouzia
Durant les dernières décennies, plusieurs études cliniques et épidémiologiques ont montré que l’hyperhomocystéinémie (Hhcy) est associée aux maladies cardiovasculaires et pourrait donc représenter un facteur de risque. L’Hhcy expérimentale est induite chez le rat des sables Psammomys obesus, par une injection intrapéritonéale quotidienne de 70 mg/kg de méthionine pendant 6 mois. Nous avons analysé l’'impact de l'Hhcy sur certains paramètres biochimiques plasmatiques et sur les structures cellulaires des trois organes (cœur, aorte et foie). Les altérations cellulaires et matricielles des organes ont été analysées par des techniques histo-morphométriques. Une étude in vitro est réalisée sur des cellules musculaires lisses aortiques (CMLs) avec une concentration élevée de méthionine, afin d’étudier les effets de cette dernière sur ces cellules. Nos résultats montrent que l’Hhcy altère non seulement l’homéostasie plasmatique mais aussi des altérations structurales marquées par une augmentation significative des composants de la matrice extracellulaire, en particulier des collagènes qui se sont accumulés dans les espaces interstitiels et périvasculaires des organes étudiés indiquant une installation d’une fibrose. Une stéatose hépatique a été également observée suite à l’administration de la méthionine. Une analyse plus approfondie de l'aorte a montré que l’Hhcy induit également des altérations vasculaires, notamment une réorientation et une prolifération des CMLs associées à la formation d'anévrismes. Nos résultats montrent pour la première fois que l’Hhcy peut induire un phénotype de maladies cardiovasculaires et hépatiques chez Psammomys obesus, une espèce qui s'est précédemment révélée être un bon modèle pour les études sur le diabète et d'autres pathologies liées au métabolisme.
Etude phytochimique et activités biologiques d'extraits aqueux d'une plante du sud Algérien : Cistanche phelipaea (L.) Cout.
(Université Mouloud Mammeri Tizi-Ouzou, 2023) Rahim, Meriem Zohra
Les espèces appartenant au genre Cistanche sont bien connues pour leurs effets nutritionnels et thérapeutiques, cependant très peu de rapports scientifiques sont disponibles sur l'espèce Cistanche phelypaea (L.) Cout. Ce travail vise principalement à élucider l'impact des méthodes d'extraction aqueuse comprenant la décoction, l'infusion et la macération a froid des racines de C. phelypaea sur la composition phytochimique, l'activité antioxydante in vitro et celle anti-inflammatoire in vivo. L'étude phytochimique a été réalisée par des tests de criblage phytochimique au niveau de la poudre végétale. De plus, des dosages du contenu total en composés phénoliques, en flavonoïdes et en sucres suivis de l'analyse par chromatographie liquide (LC/ESI-QTOF-MS et LC/ESI-QTOF-MS/MS) ont été réalisés pour les trois extraits aqueux. L'activité antioxydante de ces extraits a été étudiée et comparée par les tests de piégeage du radical DPPH, le pouvoir réducteur du fer ferrique et l'activité antioxydante totale. La toxicité aiguë a été évaluée par l'administration orale des doses de 2 et 5g/kg de poids corporel des extraits aqueux à des souris BalbC mâles et femelles et le potentiel anti-inflammatoire a été étudié par le modèle d'oédème plantaire induit par la carragénine chez les souris BalbC. Les résultats du criblage phytochimique ont indiqué la présence de flavonoïdes libres, tanins galliques hydrolysables, coumarines, triterpènes, caroténoïdes, oses/holosides, stérols et saponosides. La décoction a permis d'obtenir un meilleur rendement d'extraction et des contenus plus élevés en composés phénoliques et en sucres totaux. Concernant les flavonoïdes, la décoction et l'infusion ont montré des contenus plus élevés que la macération. Les données obtenues à partir des analyses chromatographiques ont montré des profils qualitatifs similaires avec 14 pics chromatographiques caractéristiques en mode négatif et 6 en mode positif, ce qui a permis l'identification de la syringine, 14 glycosides phényléthanoïdes et 5 iridoïdes. Des variations ont été enregistrées pour l'abondance relative de certains composés en fonction du procédé d'extraction employé. Tous les extraits ont présenté des propriétés antioxydantes similaires dans les trois systèmes étudiés à l'exception du macérât qui a montré un pouvoir réducteur moins puissant du fer ferrique. Ce pouvoir a été corrélé au taux de flavonoïdes. L'administration orale des trois extraits n'a produit aucun effet toxique. Une réduction significative dans le pourcentage d'augmentation de l'oedème plantaire a été enregistrée chez les souris traitées par les trois extraits aqueux avec une réduction plus remarquable chez celles traitées par le décocté. A la lumière des résultats obtenus, l'utilisation des jeunes racines de C. phelipaea sous forme d'extraits aqueux dans la modulation et la prévention des états pathologiques liés au stress oxydatif et à l'inflammation est très favorable en terme de balance bénéfices-risques et la décoction serait la forme la plus efficace.
Optimisation de l’obtention de produits antioxydants et évaluation de leurs activités : application aux polyphénols issus de l’extraction écologique de l’olive et des sous-produits oléïcoles ainsi qu’aux protéines laitières et leurs fragments d’hydrolyse
(UNIVERSITE MOULOUD MAMMERI DE TIZI OUZOU, ALGERIE, 2023-01-11) Akli, Hamida
En vue de contribuer à explorer les voies de valorisation des sous-produits issus de l’obtention de l’huile d’olive et des fromages, nous avons mené des investigations pour rechercher les conditions optimales d’extraction de polyphénols issus des feuilles d’oliviers ainsi que l’évaluation de l’activité anti-oxydante de ces produits et celles des protéines de lactosérums des laits bovin, ovin, caprin et camelin. L’extraction des composés phénoliques à partir des feuilles d’olivier a été optimisée en utilisant des solvants eutectiques profonds (DESs) à base de glycérol avec différents acides aminés (lysine, proline et arginine). Un effet significatif est observé avec tous les facteurs étudiés vis-à-vis de l’activité anti-oxydante mesurée avec le test du FolinCiocalteu d’une part, et par la réduction du cuivre (CUPRAC) d’autre part. L’extraction des polyphénols sous les conditions optimales a abouti aux rendements d’extraction les plus importants avec les solvants eutectiques profonds où le solvant glycérol-lysine s’avère le plus performant comparé au à tous les solvants utilisés. L’obtention des antioxydants a été optimisée en utilisant différents plans expérimentaux. C’est le cas du plan factoriel complet utilisé pour évaluer l’impact du temps de sonication et du ratio enzyme/substrat sur l’hydrolyse enzymatique des protéines sériques avec la chymotrypsine, trypsine et la pepsine. L’hydrolyse avec les combinaisons d’enzymes (pepsine-chymotrypsine, pepsine-trypsine, et chymotrypsine-trypsine) est également optimisée en appliquant le plan Box-Behnken où le temps de sonication, le ratio enzyme/substrat ainsi que la portion des enzymes (E1:E2) du ratio total enzyme/substrat ont été les variables étudiées. L’enzymolyse sous les conditions optimales a permis d’atteindre les valeurs d’activité anti-oxydante les plus élevées avec la chymotrypsine pour les espèces bovines, caprines et ovines. Par contre, la valeur d’activité anti-oxydante la plus élevée pour l’espèce cameline est observé avec le modèle de la pepsine-chymotrypsine. Ces résultats suggèrent la convenance des modèles chymotrypsine le cas de l’hydrolyse des protéines sériques et le glycérol-lysinepour l’extraction des polyphénols
Giardia intestinalis : Prévalence et caractérisation moléculaire à partir de populations infantiles et adultes dans deux régions différentes de l’Algérie
(Universite Mouloud MAMMERI Tizi-Ouzou, 2021) Belkessa, Salem
Giardia intestinalis est l'une des causes les plus fréquentes de diarrhée, de douleurs abdominales, de flatulences et de malabsorption induites par les parasites et comprend plusieurs génotypes (assemblages A à H). Dans la plupart des régions d'Afrique, l'épidémiologie moléculaire de la giardiase reste incertaine. Deux études ont été menées, la première menée entre 2012 et 2013 dans la partie Ouest d'Alger qui a porté sur un total de 2054 individus issus des consultations cliniques à titre externe ou pour certains hospitalisés à l'hôpital universitaire Beni-Messous d'Alger. Une recherche microscopique a été réalisée pour identifier les ovules et les parasites entiers. La seconde étude a été réalisée de 2013 à 2018 dans quatre hôpitaux en Algérie. Un total de 119 échantillons fécaux issus de 55 enfants, 37 adultes et 27 individus d'âge indéterminé, révélés positifs vis à vis des parasites intestinaux par microscopie, ont subi des analyses moléculaires par le test PCR en temps réel pour la recherche de l’ADN de Giardia. La caractérisation moléculaire de Giardia a été réalisée par PCR spécifiques à l'assemblage et par PCR utilisant des amorces ciblant le gène du triose phosphate isomérase (tpi). Le taux global d'infection parasitaire dans la première étude était de 28%. Sur un total de 567 échantillons parasitaires positifs, Blastocystis était le plus fréquemment identifié (57.3%), suivi par Endolimax nana (41.0%), Entamoeba histolytica / dispar (19.6%), G. intestinalis (17.1%), Entamoeba coli (13,9%), Chilomastix mesnili (1.0%), Iodamoeba bütschlii (0.7%), Entamoeba hartmanni (0.5%) et Cryptosporidium spp. (0.2%). Les parasites intestinaux étaient généralement plus fréquents chez la population adulte que chez les enfants, à l’exception de Giardia, qui était plus fréquent chez les enfants (P = 0,0001). Le portage de Giardia n’était pas associé au facteur sexe (P = 0.94). En comparaison à d'autres infections parasitaires intestinales, les manifestations cliniques telles que les douleurs abdominales (P = 0.28) et la diarrhée (P = 0.82) n'ont pas été significativement liées à l'infection par Giardia. La seconde étude a montré que 67% (80/119) des échantillons étaient positifs vis à vis de Giardia par le test PCR en temps réel. Sur un total de 48 échantillons PCR en temps réel moyennement-hautement positifs, le génotypage tpi a attribué 22 échantillons à l'Assemblage A et 26 à l'Assemblage B. Les valeurs de seuil de cycle des échantillons stockés dans le bichromate de potassium (2.5%) étaient significativement inférieures à celles stockées dans de l'éthanol (70%) (P <0.001). Contrairement à l'Assemblage A, l'Assemblage B présentait une diversité génétique substantielle et une hétérozygotie allélique. La PCR spécifique à l'assemblage s'est avérée spécifique pour discriminer l'assemblage A ou B, mais pas aussi sensible que le génotypage tpi. En conclusion, Giardia intestinalis est plus fréquent chez les enfants. Cependant, les symptômes intestinaux ne semblaient pas être plus liés à Giardia qu'à d'autres parasites intestinaux. Nous confirmons que la PCR en temps réel est plus sensible pour la détection de Giardia dans les selles par microscopie, de même, une amplification et un séquençage robuste du gène tpi sont réalisables par le test PCR en temps réel sur des échantillons modérément à fortement positifs. Enfin, cette étude est l'une des rares réalisées en Afrique à fournir des données sur le génotypage de Giardia chez l'homme. Les deux assemblages A et B étaient couramment observés et non-associés à des données sociodémographiques spécifiques.
Etude d'un écosystème aquatique pollué par les rejets industriels de la raffinerie pétrolière de la wilaya de Skikda et utilisation des microorganismes isolés à partir de cet écosystème pour l'élimination d'HAP contenus dans ces rejets
(Universite Mouloud MAMMERI Tizi-Ouzou, 2021) Belahmadi, Mohamed Seddik Oussama
La présente étude vise, d’une part, l'évaluation et le suivi spatio-temporels de la contamination par les hydrocarbures dans l'eau et les sédiments de la baie de Skikda (Algérie), suite à la présence d'eaux usées industrielles rejetées par un complexe de raffinerie de pétrole dans la zone. Et d’autre part de faire un inventaire des espèces microbiennes existantes et de les réutilisé pour la dégradation du Pyrène. Des échantillons d'eau et de sédiments ont été prélevés sur six sites différents au cours des quatrièmes saisons. Les hydrocarbures totaux (THC) ont été déterminés par une méthode gravimétrique, tandis que les hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP) (anthracène, pyrène et benzo (a) pyrène) par chromatographie liquide haute performance (HPLC-UV/Vis). Les résultats obtenus indiquent une forte contamination par les hydrocarbures dans les échantillons d'eau et de sédiments des sites exposés à la raffinerie industrielle. Les concentrations de THC, d'anthracène, de pyrène et de benzo (a) pyrène enregistrées dans l'eau au cours des quatre saisons étaient dans ordre de : 78 - 9457 µg / L;
Contribution à la caractérisation des décolorations des aiguilles du pin noir (pinus nigra arnold ssp.mauretanica maire et payer) dans Parc National du Djurdjura (Algérie)
(Universite Mouloud MAMMERI, 2019-01-19) HEDJAM, Hakima
Le pin noir (Pinus nigra Arnold ssp. mauretanica Maire et Peyer) est une sous espèce endémique au Parc National du Djurdjura. Cette espèce présente des symptômes de décolorations des aiguilles. L’objectif de cette étude est de caractériser ces symptômes de décoloration afin de protéger cette espèce. Les résultats obtenus révèlent la présence de 9 symptômes principaux qui sont: 1. décolorations sous forme de marbrures chlorotiques (DM) (46,4%), 2. aiguilles marron d’un côté (AMC) (5,7%), 3. décolorations jaunâtres (DC) (57,6%), 4. décolorations sous forme de points d’impacts marron (DPIM) (22,6%), 5. aiguille abîmée à son extrémité (AE) (20 ,1%), 6. aiguille à moitié ou totalement décolorée (aiguille morte) (AM) (7,4%), 7. décolorations sous forme de bande jaune (DBJ) (7,4%), 8. décolorations sous forme de bande marron (DBM) (7,4%), 9. décolorations sous forme de bande transparente (DBT) (6%). Parmi les causes possibles de cette décoloration nous avons des causes biotiques telles que les cochenilles et les Aphides (pucerons) où nous avons pu identifier une nouvelle espèce pour l’Algérie qui est Eulachnus tuberculostemmatus (Theobald, 1915), et des causes abiotiques tel que l’ozone atmosphérique.
Bioécologie du carpocapse du pommier Cydia pomonella L. (Lepidoptera :Tortricidae) et inventaire de la faune arthropodologique dans des vergers de pommier traités et écologique dans la région de Tizi-Ouzou (Sidi Nâamane et Draa Ben Khedda)
(Universite Mouloud MAMMERI, 2019-06-12) Guermah, Dyhia
L’étude a porté sur la bioécologie du carpocapse Cydia pomonellaL. dans des pommeraies de 5 variétés différentesdans les régions de Draa Ben Khedda et Sidi Naâmane (Tizi-Ouzou). Les résultats montrent l’existence de deux périodes de vols (2 générations) sur les variétés Anna et Dorset golden dans la région de Draa Ben Khedda et trois périodes de vols (3 générations) sur les variétés Anna, Golden delicious et Red delicious dans la région de Sidi Naâmane. Les attaques occasionnées par ce micro-lépidoptère sur fruit peuvent être considérable en absence de traitements phytosanitaires, notamment sur la variété Red delicious qui présente des dommages de l’ordre de 46%.L’inventaire des arthropodes réalisé au sein des cinq parcelles par l’utilisation de 4 méthodes d’échantillonnagesle filet à papillon, filet fauchoir, pots Barber et pièges aériens jaunes nous a permis de capturer 359 espèces réparties en 131 familles, appartenant à 13 ordres et à 4 classes d’arthropodes. Les valeurs de l’indice de diversité de Shannon-Weaver sont assez élevées, elles varient de H’= 2,69 bits à H’= 7,39 bits. L’équitabilité obtenue pour chaque type de piège varie de E= 0,74 à E= 0,95, ces valeurs tendent vers 1, ce qui traduit un équilibre entre les espèces du milieu au niveau de chaque parcelle. L’effet comportemental des larves néonates C.pomonella, a permisde constater que pour les jeunes larves néonates, une réponse rapide avec un temps relativement faible en présence du milieu Spodoptera et de pomme séparément. Par contre les larves âgées marquent une préférence pour le milieu composé de morceaux de pommes.L’attractivité moyenne des larves néonates du carpocapse du pommier C.pomonellaen présence des composés organique volatils varie en fonction des mélanges testés. Le mélange B et D semblent manifester un fort effet attractif, le mélange A et C présente une faible attractivité vis-à-vis des larves néonates.
Etude de la caséine béta du lait de dromadaire collecté dans le sud Algérien : isolement, caratérisation et recherche de molécules bioactives
(Universite Mouloud MAMMERI, 2019) Almi- Sebbane, Dalila
Le lait de dromadaire, malgré sa valeur nutritionnelle reconnue, demeure insuffisamment exploré au regard de ses caractéristiques physico-chimiques et des allégations santé, véhiculées depuis des temps très lointains et dont certaines sont mises en évidence récemment par plusieurs travaux scientifiques. Dans ce cadre, il est établi que les caséines, protéines principales du lait, sont connues comme étant une source riche en peptides bioactifs. Qu’en est-il des caséines du lait de dromadaire ? C’est en partie pour avoir des éléments de réponses à cette question que nous avons mené une étude ciblée sur la caséine β, protéine micellaire majeure de ce lait. À partir du lait camelin collecté dans la région d’El Oued (Algérie), les caséines camelines ont été isolées et la caséine β a été purifiée préférentiellement par chromatographie liquide rapide des protéines (FPLC) sur Q-Sépharose, alors que les contrôles électrophorétiques sont réalisés par électrophorèse sur gels de polyacrylamide dans des conditions variées (PAGE native, PAGE-urée et PAGE SDS). La sensibilité des caséines totales et de la caséine β à l’action de trois enzymes digestives : trypsine, chymotrypsine et la pepsine a été testée. L’activité anti-oxydante des différentes fractions protéiques (avant et après hydrolyse) a été évaluée par deux tests : le DPPH et le pouvoir réducteur du fer ferrique (FRAP).Les résultats ont montré que les caséines totales ainsi que la β-caséine sont plus sensibles à l’action de la pepsine que la trypsine et la chymotrypsine.Les hydrolysats pepsiques ont donné des activités anti-oxydantesles plus élevées (autour de 70 % d’inhibition du DPPH).Au regard de cette forte activité, l’hydrolysat pepsique de la β-caséinea été fractionné en utilisant des membranes d'ultrafiltration(seuil de coupure de 1 et 10 kDa). Sur les perméats obtenus (et sur la protéine initiale), nous avons recherché l’activité antimicrobienne sur 3 souches bactériennes:Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus CNRZ 3 et Listeria innocuaATCC33090 parmicrodilution. Les bactéries testées n'ont pas été affectées par la β-CN non hydrolysée à 0,5 et 1 mg/mL. Après ladigestion par la pepsine,l’ensemble des fractions recueillies (Prm : <1kDa, Rt2 : > 1kDa et < 10 kDa, Rt1 : >10kDa)ont montré une activité antibactérienne significative. La fraction Prm étant la plus efficace, en particulier contre les bactéries Gram+ :Staphylococcus aureus CNRZ 3 et Listeria innocuaATCC 33090 (à 1 mg/mL)et les pourcentages d’inhibition sont respectivement : 58,3et 45,8. Cette fraction analysée par spectrométrie de masse en tandem à ionisation nano-electrospray couplée à la chromatographie liquide (HPLC/nESI-MS/MS)est composée de 129 peptides dont 2 d'entre eux, f (193-204) et f (193-213), présentaient au moins 50 % d'homologie avec les casecidines15 et 17 de la β-caséine bovine, peptides antibactériens identifiés, dont un modèle de structure tridimensionnel est proposé.
Etude du potentiel antifongique, antiaflatoxinogène et antioxydant de certaines huiles essentielles et leur efficacité dans le système alimentaire
(Universite Mouloud MAMMERI, 2019-07-01) Ben Miri, Yamina
Ce travail a pour objectif de déterminer en premier lieu le profil chimique des différentes huiles essentielles (HEs) du Citrus limon L. var. Eûreka (C. limon), Citrus sinensis L. var. Valencia (C. sinensis), Cuminum cyminum L. (C. cyminum), Coriandrum sativum L. (C. sativum), Laurus nobilis L. (L. nobilis), et Thymus capitatus L. (T. capitatus), ensuite déterminer leur pourvoir d’inhibition de la croissance de Aspergillus flavus E73 (A. flavus) ainsi que sur la production de l’AFB1. La fungitoxicité, l’activité antioxydante, la teneur en phénols, la phytoxicité et l’effet in vivo ont également été évaluées. De bons rendements en HEs ont été enregistrés pour les différentes matières végétales, le rendement le plus élevé est celui de L. nobilis (1,13%), suivi par C. cyminum (1,08%), T. capitatus (0,82%), C. sativum (0,7%), C. limon (0,62%) et en dernier lieu C. sinensis (0,55%). Les HEs obtenus ont été caractérisées par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (CG/SM). Les analyses ont révélé que le limonène est le composé majortaire des HEs de C. sinensis (82,6 %) et C. limon (54,95 %). Les HEs de C. cyminum et C. sativum ont été dominées par le cuminaldehyde (65,98%) et le linalol (78,86%), respectivement. Le 1,8-cinéole (35,54%) est le composé le plus dominant dans l’HE de L. nobilis tandis que l’HE de T. capitatus a été caractérisée par prédominance de deux composants, le thymol (25,82%) et le linalol (23,40%). Une corrélation positive entre la diminution subséquente de la croissance de l’A. flavus E73, de la biomasse mycélienne et la production d’AFB1 et la présence des HEs. L’inhibition complète a été enregistrée à 1,75 mg/ml pour C. limon, 2,00 mg/ml pour C. sinensis, 1,25 mg/ml pour C. cyminum, 1,50 mg/ml pour C. sativum, 1,75 mg/ml pour L. nobilis et finalement 1,00 mg/ml pour T. capitatus. La fungitoxicité des HEs a été estimée sur neuf (09) moisissures à savoir Aspergillus carbonarus (A. carbonarus), Aspergillus fumigatus (A. fumigatus), Aspergillus niger (A. niger), Aspergillus ochracus (A. ochracus), Aspergillus tamari (A. tamari), Aspergillus terreus (A. terreus), Fusarium sp., Penicillium sp. et Rhizipus sp. Les HEs sont efficaces envers ces moisissures toxinogènes. Les activités de piégeage du radical DPPH, l’oxydation des lipides du couple β-carotène /acide linoléique ont montré des activités modérées. En outre, ces dernières ont été utilisées comme marqueurs pour l’élucidation de l’inhibition à base d’antioxydants de la biosynthèse d’AFB1. Au cours du test phytotoxique, les HEs (sauf pour L. nobilis) n’ont pas manifesté un effet néfaste sur la germination des graines de blé de HD1220 (Hiddab) et d’AS 81189 A (Ain Abid) montrant leur caractère non phytotoxique. Ces HEs ont également montré une efficacité prononcée in vivo fournissant jusqu’à > 75% de protection des graines de blé des deux variétés de la contamination par A. flavus E73. Tous ces résultats ont révélé que les HEs de C. limon, C. sinensis, C. cyminum, C. sativum, L. nobilis et T. capitatus constitueraient une solution appropriée pour la formulation d’additifs alimentaires à base de plantes/conservateurs contre la biodétérioration des aliments provenant des moisissures du stockage ainsi que leur contamination par l’AFB1.
Etude de l'infection du virus d'epstein-barr dans le cancer gastrique en Algerie
(Universite Mouloud Mammeri, 2018) Aslane, Mouna
Le virus d'Epstein-Barr (EBV) est associé à une variété de malignités humaines y compris le cancer gastrique (CG). Il n’existe pas d'étude sur l’association de l’EBV avec le CG en Algérie qui est une région endémique pour le cancer du nasopharynx associé à l’EBV. Ce travail a été réalisé afin d'étudier la présence et la prévalence de l’EBV dans le CG chez des patients Algériens, pour définir le type de latence adopté par ce virus et enfin pour rechercher de nouveaux marqueurs de diagnostic pour les CG associés à l’EBV (CGaEBV); 97 cas sélectionnés de carcinomes gastriques, 6 cas de lésions précancéreuses présentant des dysplasies et 10 cas de tissus non néoplasiques montrant des gastrites ont été examinés pour rechercher une infection par EBV. La recherche des petits ARN codés par l’EBV (EBER-1 et EBER-2) a été effectuée sur tous les cas sélectionnés en utilisant des sondes PNA par hybridation in situ en fluorescence. L'expression de LMP-1 a été évaluée dans les cas de cancers gastriques EBV positifs en utilisant des anticorps monoclonaux spécifiques anti-LMP-1 et par deux techniques d'immunofluorescence et d'immunohistochimie. Afin de rechercher la présence simultanée des EBERs et LMP-1 dans les tissus de carcinomes gastriques, un double marquage à immunofluorescence et hybridation in situ en fluorescence a été employé sur 15 de coupes tissulaires. De l’autre côté, la présence de LMP-1 a été analysée dans les sérums de 20 patients atteints de CG par le test ELISA. Les résultats obtenus montrent que 22 sur 97 cas des cancers gastriques (22,7%) ont été EBV positifs. Les EBERs ont été présents dans les cellules épithéliales malignes et dans certains cas des lésions précancéreuses, tous les cas non néoplasiques ont été EBERs négatifs, nous avons également prouvé que les CGaEBV ont été associé à l'âge des patients et au degré de la différenciation tumorale. En outre, la LMP-1 a été exprimée dans 8 des 22 EBV-positifs. L'expression a été membranaire et cytoplasmique, limitée aux cellules malignes et absente dans les tissus non néoplasiques. L'immunofluorescence combinée à l'hybridation in situ en fluorescence a déterminé une co-localisation des EBERs et de LMP-1 dans des cellules malignes gastriques. De plus, le test ELISA pour LMP-1 a été positif dans 50% des sérums provenant de patients souffrant de GC en Algérie, tandis que les sérums provenant de donneurs sains ont été négatifs. Nous avons conclu que la prévalence du CGaEBV est de 22,7% en Algérie avec des caractéristiques clinico-pathologiques spécifiques, le taux élevé d'EBV dans le carcinome gastrique suggère que ce dernier joue un rôle important dans la tumorogénèse et que l'infection peut précéder la transformation. De plus, l'expression de LMP-1 indique que l’EBV est présent dans des cellules infectées de façon latente, cette protéine peut être nécessaire dans la carcinogenèse du CGaEBV et elle peut former un bon marqueur de diagnostic pour ce type de tumeur.
Activites biologiques et diversite en mycoendophytes des feuilles de pegnum harmala L. de la region de laghouat
(Universite Mouloud Mammeri, 2018) Ouzid, Yasmina
Les champignons épiphytes et endophytes vivent en interaction complexe avec les plantes où les deux partenaires tirent profit. Les plantes médicinales constituent une source inépuisable de molécules bioactives. Elles peuvent être produites par les différents organes de la plante ou par des mycoendophytes mutualistes présents au sein de cette dernière. Notre étude a été réalisée sur une plante médicinale spontanée de la région de Laghouat (Algérie) : Peganum harmala L. Notre intérêt dans ce travail s’est porté sur la diversité des mycoendophytes et des épiphytes au niveau des feuilles de Peganum harmala L, ainsi que sur la mise en évidence des différentes activités biologiques (antimitotique, antiproliférative, antioxydante et antibactérienne) des métabolites secondaires fongiques bruts des mycoendophytes foliaires de cette essence. L’identification microscopique a révélé une abondance des genres Penicillium et Rhizopus pour les épiphytes, Cladosporium et Alternaria pour les mycoendophytes. Des interactions importantes sont décrites entre les différents taxons fongiques indiquant ainsi l’impact de ces interactions sur la biodiversité fongique au niveau des feuilles de Peganum harmala. Par ailleurs les essais antimitotiques et antiprolifératifs confirment l’action des métabolites secondaires fongiques bruts de ces mycoendophytes dans l’inhibition de la mitose, de même pour les combinaisons d’extraits réalisées, produisant ainsi des anomalies chromosomiques, cellulaires ainsi qu’un effet cytotoxique. L’activité antioxydante de ces derniers a été réalisée par le test Diphénylpicrylhydrazyl (DPPH). Les molécules antioxydantes extraites par l’acétate d’éthyle sont en relation avec la teneur en polyphénols retrouvée dans les différents extraits de métabolites secondaires fongiques bruts ainsi que l’extrait foliaire chez Peganum harmala L. En outre, l’évaluation de l’activité antibactérienne a révélé une différence dans la sensibilité des souches bactériennes vis-à-vis des métabolites secondaires des mycoendophytes foliaires de Peganum harmala L selon leurs conditions culturales à savoir : leurs présence ensemble ou séparément vis-à-vis de chaque souche bactérienne et le temps d’incubation.
Etude des activités anti-oxydante, antifongique et hypoglycémiante des margines d'olives et de leur extrait phénolique.Applications sur matrice alimentaire et sur modèle murin et cellulaire
(Universite Mouloud Mammeri, 2018-06-28) Senani-oularbi, Nassima
Les margines ou effluents liquides de l’industrie huilière ne cessent de poser de grands problèmes de pollution de l’environnement. Pour résoudre ces problèmes de pollution des études de valorisation de ces effluents ont été réalisées. Les margines sont une source naturelle riche en substances bioactives entre autre les polyphénols. Ces derniers présentent de nombreux avantages pour la santé et des effets pharmacologiques intéressants. Des margines récoltées dans une région de la Kabylie (Algérie), ayant fait l’objet d’une étude axée sur trois parties. La première partie visait à étudier l’effet antioxydant in vitro de la poudre de margines (PM) et de l’extrait phénolique des margines (EPM). La deuxième partie de ce travail visait à étudier l’activité de la PM et EPM sur la croissance d'Aspergillus flavus et la production d'aflatoxine B1 (AFB1) dans le milieu SMKY et sur le maïs choisi comme matrice alimentaire. La troisième partie de notre travail consistait à évaluer l'effet hypoglycémiant de la PM et de l’EPM ainsi leur effet sur la régulation de l'absorption intestinale du glucose chez la souris, comme cible du traitement du diabète du type 2 (DT2). L’activité anti-oxydante a été réalisée par trois tests. Les tests de piégeage des radicaux libres (DPPH., ABTS.+) et le test du pouvoir réducteur de l’ion ferrique (RP). Pour la partie antifongique, le milieu SMKY et le maïs broyé ont été complétés avec différentes concentrations de PM et d’EPM, inoculés avec A. flavus et incubés à 28 °C pendant 7 jours. La biomasse ainsi que le diamètre des mycéliums ont été déterminés dans le milieu SMKY et maïs broyé, respectivement. La synthèse d'AFB1 a été quantifiée par la méthode ELISA compétitive directe. Dans le milieu SMKY, les résultats ont montré que la biomasse des mycéliums était réduite à 50 % et 46,2 % avec des concentrations de 250 mg/L et 4 g/kg d’EPM et de PM, respectivement. Une inhibition complète a été obtenue avec une concentration de 500 mg/L et 10 g/L d’EPM et de la PM, respectivement. Dans le maïs broyé, l’EPM et la PM ont réduit la croissance mycélienne de plus de 50 % avec 800 mg/L et 16 g/kg et une inhibition complète a été obtenue à 1000 mg/kg et 20 g/kg, respectivement. L'AFB1 est totalement inhibée dans le milieu SMKY à 400 mg/L et 8 g/L d’EPM et de PM, respectivement. En ce qui concerne la partie portant sur l'effet hypoglycémiant de la PM et de l’EPM a été évalué chez des souris saines en utilisant un test de tolérance au glucose par voie orale (OGTT). Une analyse par Western blot a été réalisée pour étudier l'absorption du glucose intestinal par SGLT-1 et la protéine kinase C (PKC), une protéine effectrice clé au niveau des membranes de la bordure en brosse de la muqueuse jéjunale de souris. Nous avons observé que la glycémie diminuait significativement en présence de l’EPM et de la PM, respectivement aux concentrations de 500 mg/kg et 4 g/kg de poids corporel par rapport à la réponse à l'administration orale de glucose seul (1g/kg). L’EPM aurait induit une forte diminution de la protéine SGLT-1 (88 %) ainsi que de la PKC (70 %) en réponse au glucose par rapport aux groupes témoins. Les résultats obtenus dans ces études démontrent la possibilité d'exploiter l’activité anti-oxydante de la PM et de l’EPM dans le contrôle de la souche aflatoxinogène A. flavus dans les céréales et les aliments stockés, et suggèrent aussi que la PM et l’EPM peuvent être bénéfiques pour le traitement du DT2 grâce à leur effet hypoglycémiant en agissant sur le co-transporteur du glucose sodium dépendant SGLT-1 et sur la PKC comme cible thérapeutique. Parmi les perspectives d’utilisation des sous- produits oléicoles on citera quelques applications comme l’amélioration de la durée de vie d’un aliment et leur implication dans la prévention des maladies liées au stress oxydant
Aptitudes à la transformation du lait de chamelle en produit diveres: effet des enzumes coagulantes extraites de caillettes de dromadaires
(Universite Mouloud Mameri, 2012-10-18) Boudjenah, Saliha
Le lait camelin est connu pour sa richesse en éléments de base très importants. Il est aussi réputé pour ses allégations de santé. Toutefois, sa valorisation est encore assez limitée compte tenu de ses aptitudes faibles à la coagulation. Dans ce cadre et, pour lever cet handicap, nous nous sommes proposé d’étudier l’apport des enzymes gastriques issues de dromadaires de différents âges (1, 3 et 9 ans). Les analyses préliminaires sur le lait de dromadaire collecté à travers les régions de Ghardaïa, Ouargla et El Oued ont montré que ce dernier possède une bonne valeur nutritionnelle avec un pH moyen de 6.53 et une acidité égale à 17°D. Il est caractérisé par un taux de vitamine C élevé (45mg/l) et un apport protéique appréciable de l’ordre de 33g/l (avec environ 27 g/l de caséines et 7g/l de protéines sériques). La détermination de sa composition minérale a mis en évidence sa richesse en cuivre, en zinc et en fer. Le genre Pseudomonas constitue la flore psychrotrophe prédominante (37%) dans le lait cru entreposé à 4 et 7°C pendant 4 jours. Les extraits enzymatiques coagulants, isolés en utilisant le protocole de VALLES et FURET (1977 avec un rendement de 75%, sont obtenus à 38°C et à 0,2M d’acide chlorhydrique. L’activité coagulante de ECD9 (issu des caillettes de dromadaires le plus âgé) est la plus élevée (0,360). Cet extrait possède en plus une activité protéolytique relativement faible. Les temps de floculation mesurés ont permis de confirmer la bonne affinité des extraits existant pour le lait camelin et bovin. Le suivi de la stabilité de l’extrait coagulant pendant 90 jours selon trois modes de conservation (réfrigération, congélation et lyophilisation) a montré que l’activité coagulante est mieux préservée dans les échantillons congelés (96% d’activité conservée), contre 55,3 % (extrait lyophilisé) et 18 % (extrait réfrigéré). Le comportement de ces extraits en électrophorèse PAGE-SDS avec ou sans -mercaptoéthanol a montré qu’il ya une différence assez nette entre les profils provenant des deux origines (jeune et âgé). Enfin, un fromage camelin de coagulation mixte en utilisant l’extrait enzymatique issu de dromadaire âgé a été fabriqué avec un rendement jugé satisfaisant (17%, contre 20% pour le lait bovin). L’évaluation sensorielle a permis aux dégustateurs sélectionnés d’attribuer au fromage élaboré une appréciation favorable. Cette appréciation organoleptique a été renforcée par une analyse instrumentale (analyse du profil de texture ou TPA) qui a montré que le caillé camelin diffère du caillé bovin pour tous les paramètres mesurés (dureté, élasticité, cohésion et adhésivité). De plus, l’examen de la microstructure de ces fromages par microscopie électronique à balayage (MEB) a montré clairement que le réseau du caillé bovin est caractérisé par un espace plus ouvert, alors que le caillé camelin a une structure compacte et uniforme
Extraction, caractérisation des polysaccharides et des polyphénols issus des sous produits oléicoles. Valorisation des polysaccharides à visée alimentaire
(Universite Mouloud MAMMERI, 2015-10-17) Nadour, Malika
La production industrielle d’huile d’olive dans les pays méditerranéens, à l’instar de l’Algérie, génère de grandes quantités de sous-produits qualifiés de margines et grignons. Les margines, par leur richesse en composés phénoliques (CP) peu biodégradables, causent un réel problème pour l’environnement. La valorisation de ces déchets par extraction de molécules d’intérêt tels que les polysaccharides constitue l’une des solutions pour leur traitement. L’objectif de ce travail était l’extraction des polysaccharides et des CP et l’identification de leurs activités biologiques. Une caractérisation biochimique des extraits polysaccharidiques a été réalisée par dosages colorimétriques et par chromatographie. La fraction soluble extraite des margines (FSM) s’est révélée être une source intéressante de polysaccharides. Cette fraction a été étudiée par chromatographie échangeuse d’anion. La fraction FSM a été également fractionnée par chromatographie d’exclusion stérique et étudiée par spectroscopie infrarouge à transformée de Fourier (FTIR). La composition en monosaccharides de cette fraction est également déterminée par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse. Les résultats indiquent que tous les extraits polysaccharidiques présentent une composition hétérogène en monosaccharides, le glucose étant le sucre majeur. La fraction FSM apparait être composée de pectines, d’hémicellulose et de cellulose. Les résultats des analyses réalisées montrent la présence dans cette fraction de CP et de protéines. Les CP tels que l’acide caféique et l’acide férulique, sous forme de monomères, de dimères et/ou d’oligomères, pourraient être liés à la partie polysaccharidique du FSM par des liaisons esters ou éthers. L’étude de l’activité biologique des extraits polysaccharidiques des margines est réalisée par des tests prébiotiques et des tests antioxydants (piégeage d’espèces radicalaires et pouvoir réducteur). Les résultats témoignent de l’activité prébiotique de l’extrait RIA et FSM par leur résistance à l’hydrolyse gastrique et leur stimulation de la croissance de certaines souches de lactobacilles. La fraction FSM a montré également une activité antioxydante intéressante notamment par le piégeage du radical DPPH et du radical hydroxyle. L’activité antioxydante des CP de la pulpe d’olive (CPO) est déterminée par des tests chimiques et sur les hématies humaines. Les résultats montrent que ces extraits sont capables de neutraliser les radicaux DPPH et le peroxyde d’hydrogène et montrent un pouvoir réducteur intéressant. L’application des CPO sur les hématies montre un pouvoir anti-hémolytique important. En outre, ils protègent les lipides et les protéines membranaires érythrocytaires du stress oxydatif induit sous l’action d’un système oxydant générateur de radicaux hydroxyles. Ainsi les sous-produits oléicoles, à l’exemple des margines, est une source de molécules à activité biologique et leur extraction peut constituer l’une des stratégies de valorisation de ce déchet.
Isolement et séparation des protéines sériques du lait de chamelle : mise en évidence du phénomène de désamidation de l'a-lactalbumine;conséquences sur la stabilité structurale
(Universite Mouloud Mammeri, 2015) Si Ahmed Zennia, Saliha
Les protéines sériques du lait camelin collecté dans la région de Ouargla ont été fractionnées par chromatographie d’échange d’anions sur DEAE Cellulose et par perméation sur Sephacryl S200 et caractérisées par leurs comportements électrophorétiques sur gel de polyacrylamide dans diverses conditions. L’α-La cameline a été isolée par FPLC sur mono Q. Cette protéine migre en une seule bande en SDS-PAGE et en deux bandes en Alkaline-PAGE. La désamidation non enzymatique de l’α-la cameline été mise en évidence en suivant par FPLC sur mono Q son comportement quand elle est incubée dans un tampon phosphate de sodium, aux pH (7,4 et 8,4) pendant des temps variables (0-80 h) à 37°C. Contrairement à l’α- La du lait bovin, celle provenant du lait de dromadaire, reste instable dans les conditions physiologiques à 37°C, à pH neutre (7,4) ou à pH plus basique (8,4). Nous avons montré que cette transformation chimique est séquencée avec apparition de deux nouvelles isoformes : A2 (qui apparait rapidement aux pH 7,4 et 8,4) et A3 (qui n’apparait que lentement à pH 8,4). Ce résultat est confirmé par l’étude de la modélisation moléculaire de cette protéine. Les trois isoformes de l’α-La cameline A1, A2 et A3, purifiées en deux étapes, par FPLC puis par HPLC, ont été caractérisées par 2D-PAGE et leurs pHi apparents déterminés sont estimés à 5,63 (A1), 5,36 (A2) et 5,05 (A3). A l’aide de la spectroscopie (FT-ICR), les masses moléculaires suivantes ont été déterminées pour les trois isoformes : 14 421,8659 (A1), 14 422,8569 (A2) et 14 423,8479 Da (A3). L’analyse par spectrométrie de masse en tandem (FTICR- MS/MS) a permis de montrer qu’il s’agit bien des résidus Asn16 et Asn45 qui étaient sujets au phénomène de désamidation chimique. La désamidation non enzymatique de l’α-La cameline rend la structure tridimensionnelle beaucoup plus stable. Cette conclusion est rendue possible par les résultats des approches spectrométrique, thermodynamique et protéolytique développées.
Etude de la chimiorésastance aux antimoniés chez leishmania en Algerie : Validation des tests in vitro et développement de marqueurs moléculaires
(Universite Mouloud Mammeri, 2016-06-27) Eddaikra Laama, Naouel
Les leishmanioses sont un groupe de maladies à transmission vectorielle responsables de problèmes de santé publique dans de nombreuses régions endémiques dans le monde. L’arsenal thérapeutique étant relativement réduit, les antimoniés constituent le traitement de première intention dans la plupart des pays dont l’Algérie. De nombreux cas d’échec thérapeutique ont été décrits en Algérie faisant craindre une émergence de la résistance du parasite. Par conséquent, un besoin urgent d’informations sur l’état de la susceptibilité à l'antimoine des parasites et des souches de Leishmania en Algérie est obligatoire. Ces connaissances vont non seulement mettre la lumière sur l'apparition de la résistance à l’antimoine, mais aussi sur des facteurs sous-jacents de déclenchement de résistances naturelles dans les populations de Leishmania. Le but étant de permettre la mise en place d’un système de surveillance visant à diagnostiquer les souches résistantes à l'antimoine en Algérie. Cette étude comprend deux grandes parties. Une première relative à l’évolution épidémiologique de la résistance à l’antimoine pendant 30 ans (1984-2013) à travers l’étude de 106 souches de Leishmania major, L. infantum et L. killicki isolées en Algérie comparées à un groupe de 20 souches de L. infantum isolées en France. La deuxième partie s’intéresse à l’étude des différents aspects de la résistance de Leishmania à l’antimoine sur un modèle murin génétiquement homogène. A cet effet, nous avons pu explorer différents facteurs qui régissent la susceptibilité à l’antimoine in vitro et in vivo à la recherche de marqueurs et qui pourraient permettre une surveillance efficace de la résistance à l’antimoine en Algérie. De l’ensemble de nos résultats, ressort un fait important : la baisse de susceptibilité aux drogues. Cette apparition de résistance pourrait être un phénotype intrinsèque et/ou acquis. Nos résultats sur un large panel d’espèce nous ont permis d’établir et de valider un seuil IC50 à l’antimoine, déterminant un statut de susceptibilité des souches. Ce seuil pourrait être utilisé dans des études épidémiologiques à grandes échelle dans un pays endémique tel que l’Algérie. Les résultats de susceptibilité des promastigotes à l’antimoine, en fonction des espèces et des formes cliniques, ont montré une grande variabilité, avec cependant une clusterisation en fonction des espèces. L’étude de la sensibilité à l’antimoine chez la souris BALB/c, nous a permis de caractériser le phénotype de l’infection des souches de L. major sensibles et résistantes au SbV, in vitro et de présumer la virulence comme facteur sélectif de résistance ou de sensibilité au Glucantime. Cependant, les souches naturellement résistantes à l’antimoine ont exprimé un phénotype différent. L’étude de l’infection de L. killicki, a montré quant à elle un phénotype plus lent que L. major et qui nous a permis de mettre au point un modèle pharmacologique.

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