Clonage et caractérisation moléculaire d'un ADNc de Leishmania major codant pour une protéine homologue au produit du gène SIR2 de Saccharomyces cerevisiae.
Loading...
Date
1995-09-28
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU
Abstract
Au cours de ce travail, nous avons caractérisé des antigènes du stade promastigote de L. major se fixant sur une
colonne de glutathion (LmGbp). Le sérum dirigé contre ces antigène:; (anti-LmGbp) a permis de montrer que ces
molécules sont sécrétées par le parasite et qu'elles sont exprimées chez l'amastigote ainsi que chez d'autres espèces de
Leishmania. Parmi ces molécules, une protéine de poids moléculaire apparent de 66 kDa (p66) est révélée par l'and-
LmGbp en Western-blot clans les extraits antigéniquçs de .toutes les espèces testées. A l'aide de la technique
d'immunofluorescence et de la microscopie électronique, on a pu monte.“ que la p66 est localisée dans des structures
tubulo-vésiculaires ressemblant aux endosomes des eucaryotes supérieurs et aux mégasomes décrits chez les
leishmanies.
Le criblage d'une banque d'expression d'ADNc de L. major à l'aide du sérum anti-LmGbp, a permis d'isoler et
ouvert de 381 acides aminés, codant pour une protéine de 41963 Da. Lit séquence do LmSIR2rp présente un motif
polypeptidique CysX2CysX20CysX2Cys pouvant constituer un site éventuel do fixation du zinc. De plus, la partie
C-terminale est riche en serines (16 Ser sur 40 acides aminés) qui représentent des sites potentiels de phosphorylation.
La taille du messager de LmSIR2rp en Northern-blot est de 1.8 kb et semble être transcrit à partir d'un seul gène.
D'autre part, on a produit par immunisation un sérum dirigé contre une séquence peptidique conservée (pep 58-
76) de LmSIR2rp. Cet anti-peptide révèle une bande majeure de 42 kDa, lorsqu'il est utilisé en Western-blot sur
l'extrait total de L. major et dans l'immunoprécipitation des produits de traduction in vitro, ce qui confirme le cadre
de lecture de LmSIR2rp. Par ailleurs, l'anti-peptide 58-76 reconnaît en Western-blot une bande de 64 klla dans
l'extrait d'une souche de levure qui surexprime le gène SIR2. Aucune réaction n'a été observée sur le contrôle négatif
constitué par les antigènes d'une souche de Saccharomyces cerevisiae mutante pour SIR2. Sachant que SIR2 fait 63.2
kDa, nous confirmons ainsi l'homologie de séquence.
La caractérisation d'une nouvelle protéine de L. major, présentant une homologie avec l'un des facteurs de
régulation jouant à la fois un rôle dans la commutation du type-sexuel et dans la répression des gènes télomèriques
chez la levure, nous permettra d'aborder les aspects de différenciation cellulaire, de régulation de l'expression .des
gènes et la question fortement débattue concernant l'existence de la reproduction sexuée ci i los Treanosomatidae
Description
Keywords
Leishmania major, Leishmania major:ADNc, ADNc:caractérisation moléculaire, ADNc:Clonage, Protéine homologue, Gène SIR2